導(dǎo)讀：

脂代謝的異質(zhì)性在生物系統(tǒng)中普遍存在，與糖尿病，癌癥和神經(jīng)退行性疾病密切相關(guān)，深度影響著人類的健康。想要開展精準(zhǔn)的人類代謝研究和相關(guān)療法開發(fā)，不僅需要建造合適的模型，也需要足夠精確的成像方法以獲得準(zhǔn)確的結(jié)果。然而正電子發(fā)射斷層掃描（PET）和核磁共振成像（MRI）的空間分辨率較低，無法達(dá)到細(xì)胞水平；熒光成像分辨率雖然可達(dá)亞微米級(jí)，但由于熒光染料的引入又會(huì)影響到細(xì)胞的生理活動(dòng)，導(dǎo)致分子通路的變化。振動(dòng)光譜成像方法使用的探針，相對(duì)于熒光分子具有更小的尺寸和更好的生物兼容性，不會(huì)影響細(xì)胞的正常生理活動(dòng)。常用的方法有紅外吸收和拉曼散射，其中紅外吸收具有更高的靈敏度和成像速度，但傳統(tǒng)的方法如傅里葉紅外（FTIR）的分辨率無法達(dá)到單細(xì)胞或亞細(xì)胞級(jí)；拉曼散射容易受到背景熒光影響，導(dǎo)致譜線分析結(jié)果失準(zhǔn)。

O-PTIR技術(shù)

美國PSC公司研發(fā)的全新非接觸亞微米分辨紅外拉曼同步測(cè)量系統(tǒng)——mIRage的出現(xiàn)為上述問題提供了新的解決方案。mIRage采用新型光學(xué)光熱紅外（O-PTIR）技術(shù)，不僅具備傳統(tǒng)FTIR的特性，可以對(duì)物質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)進(jìn)行解析，還克服了傳統(tǒng)紅外空間分辨率不足，無法精細(xì)表征細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)的問題，其分辨高達(dá)500 nm，可在亞微米尺度上實(shí)現(xiàn)細(xì)胞結(jié)構(gòu)以及細(xì)胞內(nèi)生物分子分布的觀測(cè)，與光學(xué)顯微鏡基本相同，有助于研究亞細(xì)胞器結(jié)構(gòu)和細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路。設(shè)備光熱膨脹技術(shù)能夠在不接觸樣品的情況下進(jìn)行檢測(cè)，大幅度簡化了樣品制備過程，全程對(duì)樣品無污染，并且沒有米氏散射問題，可在不平整的表面上取得良好的譜線。而其特殊的檢測(cè)機(jī)制使得mIRage能夠很大限度上避免水的干擾，真正實(shí)現(xiàn)對(duì)單細(xì)胞的檢測(cè)。

非接觸亞微米分辨紅外拉曼同步測(cè)量系統(tǒng)——mIRage

近期，加州大學(xué)圣巴巴拉分校的Kenneth S. Kosik研究組以棕櫚酸疊氮化物（azide-PA）作為探針，使用mIRage檢測(cè)體外細(xì)胞模型中新合成的脂質(zhì)以研究細(xì)胞脂代謝。相關(guān)文章發(fā)表在Nature communication上。這也是繼耶魯大學(xué)研究團(tuán)隊(duì)在2023年觀測(cè)DNL在活細(xì)胞和固定脂肪細(xì)胞中的分布^[1]后，mIRage在脂類代謝研究領(lǐng)域的又一突破！

研究成果概述

棕櫚酸疊氮化物（azide-PA）是一種合成脂肪酸，可用作核苷酸的修飾標(biāo)記，脂肪酸代謝的分子探針。azide-PA加入培養(yǎng)基后，可被細(xì)胞利用合成甘油三酯，磷脂和固醇類。mIRage檢測(cè)azide-PA的光譜結(jié)果顯示和PA相比，其在2100cm_-1具有疊氮基團(tuán)的吸收峰，且在此區(qū)域沒有細(xì)胞內(nèi)源性的信號(hào)，因此azide-PA非常適合用于檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的脂質(zhì)分布。

圖1. azide-PA可被細(xì)胞利用合成脂質(zhì)（左）； azide-PA/PA/細(xì)胞的IR譜（右）。

神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞在含有azide-PA的培養(yǎng)基中培養(yǎng)6.5h后，使用mIRage分別在2096 cm^-1和1744 cm^-1進(jìn)行成像，可以得到azide-PA和細(xì)胞脂質(zhì)總體的分布（圖2D）。和BODIPY染色結(jié)果對(duì)比可確定O-PTIR對(duì)脂質(zhì)成像的準(zhǔn)確性，且擬合得到O-PTIR的空間分辨率在500 nm左右（圖2E）。接下來將神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞分別在含azide-PA和僅含未修飾的PA的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，含azide-PA的培養(yǎng)基中的細(xì)胞可在2096 cm^-1成像觀察到（圖2F&圖2G）。計(jì)算細(xì)胞的總脂質(zhì)/蛋白比（1740/1650）與新合成脂質(zhì)/總脂質(zhì)比（2096/1740），可以發(fā)現(xiàn)兩種細(xì)胞的總脂質(zhì)/蛋白比沒有顯著差異，表示azide-PA具有良好的生理相容性（圖2H）；新合成脂質(zhì)/總脂質(zhì)比與預(yù)期一致（圖2I）。

圖2D：細(xì)胞總脂質(zhì)(1744   cm^-1)/新合成脂質(zhì)(2096 cm^-1)/BODIPY染色的圖像；E：O-PTIR的空間分辨率；

F：人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞經(jīng)azide-PA/PA培養(yǎng)基培養(yǎng)后的細(xì)胞總脂質(zhì)(1744 cm^-1)/新合成脂質(zhì)(2096 cm^-1)/明場的圖像；

G：azide-PA/PA培養(yǎng)基培養(yǎng)后的細(xì)胞的O-PTIR譜線；H、I：細(xì)胞總脂質(zhì)和新合成脂質(zhì)的統(tǒng)計(jì)分析。

此外，mIRage還可以長時(shí)間動(dòng)態(tài)的對(duì)活細(xì)胞內(nèi)的脂質(zhì)進(jìn)行成像，從而實(shí)現(xiàn)單細(xì)胞水平的動(dòng)態(tài)脂質(zhì)代謝：

圖3. 活細(xì)胞不同時(shí)間點(diǎn)脂質(zhì)代謝變化

經(jīng)過細(xì)胞系的檢測(cè)后，研究組接下來使用mIRage研究了hiPSC與hiPSC分化的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的脂代謝。將hiPSC與神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞在含有azide-PA的培養(yǎng)基中培養(yǎng)24h后，使用mIRage進(jìn)行成像發(fā)現(xiàn)，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞在2096 cm^-1和1744 cm^-1的信號(hào)強(qiáng)度（圖4A&圖4B），及總脂質(zhì)/蛋白比（1740/1650）與新合成脂質(zhì)/總脂質(zhì)比（2096/1740）均高于hiPSC（圖4C&圖4D），表示在hiPSC分化過程中脂質(zhì)的合成更加活躍，脂質(zhì)的合成可能與早期腦發(fā)育有關(guān)。

圖4. A：hiPSC分化的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞與hiPSC的總脂質(zhì)/新合成脂質(zhì)/明場的圖像；B：兩種細(xì)胞的O-PTIR譜線；C、D：兩種細(xì)胞的總脂質(zhì)和新合成脂質(zhì)的統(tǒng)計(jì)分析。

根據(jù)以上研究結(jié)果，非接觸亞微米分辨紅外拉曼同步測(cè)量系統(tǒng)——mIRage可以進(jìn)行高分辨率、高特異性的單細(xì)胞成像，以研究人細(xì)胞中脂代謝的研究，且可以擴(kuò)展到其他生物分子的代謝，以研究更廣泛的代謝通路和過程。O-PTIR技術(shù)與紅外探針結(jié)合的單細(xì)胞代謝成像，將帶來更多生物領(lǐng)域的新發(fā)現(xiàn)，助力開發(fā)更有效的疾病療法。

作為美國PSC公司在中國的代理，Quantum Design中國于2020年將非接觸亞微米分辨紅外拉曼同步測(cè)量系統(tǒng)—mIRage系統(tǒng)引入國內(nèi)，助力中國科研工作者取得一個(gè)又一個(gè)重大突破：

mIRage國內(nèi)部分發(fā)表文章一覽

? 南京大學(xué)借助mIRage建立了一種新型的塑料表面亞微米尺度化學(xué)變化表征方法。該工作發(fā)表在著名期刊Nature   Nanotechnology上。

? 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所借助mIRage成功實(shí)現(xiàn)對(duì) 藥物載體的原位成分分析。相關(guān)工作發(fā)表在Small Structures 上。

? 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)借助mIRage成功實(shí)現(xiàn)對(duì)玉米粉中痕量微塑料的原位可視化表征。該工作發(fā)表在Science of the Total Environment上。

? 中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)借助mIRage研究微塑料。該工作發(fā)表在Environmental Science & Technology上。

樣機(jī)體驗(yàn)

為了更好地服務(wù)中國客戶，Quantum   Design 中國子公司在北京建立了專業(yè)的客戶服務(wù)中心，引入了非接觸亞微米分辨紅外拉曼同步測(cè)量系統(tǒng)！歡迎各位老師垂詢！

參考文獻(xiàn)：

1. Spatiotemporal Heterogeneity of De Novo Lipogenesis in Fixed and Living Single Cells. J. Phys. Chem. B 2023, 127, 2918?2926

2. Single-cell mapping of lipid metabolites using an infrared probe in human-derived model systems. Nature Communications, 15(1), 350.

相關(guān)產(chǎn)品

1、非接觸亞微米分辨紅外拉曼同步測(cè)量系統(tǒng)—mIRage